ОПТИМІЗАЦІЯ БАКТЕРІАЛЬНОЇ ЕКСПРЕСIЇ ПРОТИПУХЛИННОГО ЦИТОКІНА ЕМАР II В КЛIТИНАХ ESCHERICHIA COLI BL21(DE3)PLYSE

Л. А. Бабенко, О. Ю. Скоробогатов, О. Л. Дубровський, О. I. Корнелюк

Анотація


EMAP II (ендотеліальний моноцитактивуючий поліпептид II) – новий прозапальний антиангіогенний цитокін, який має протипухлинну дію. З метою розробки генно-інженерної технології отримання EMAP II проведена оптимізація умов бактеріальної експресії клонованого в складі вектора рЕТ30а гена, що кодує ЕМАР II. Досліджено вплив концентрації індуктора синтезу IПТГ цільового білка на його кінцевий вихід, встановлено оптимальний час культивування бактеріальної культури до та після додавання індуктора. Запропоновано схему культивування E. coli BL21(DE3)pLysE для досягнення високого рівня виходу рекомбінантного цитокіна ЕМАР II на рівні 110 мг з 1 л бактеріальної культури.


Ключові слова


ЕМАР II; бактеріальна система експресії; оптимізація експресії; антипухлинний цитокін

Повний текст:

PDF

Пристатейна бібліографія ГОСТ


Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. М.: Мир. − 2002, – 589 с.

Kao J., Ryan J., Brett G., Chen J., Shen H., Fan Y.G., Godman G., Familletti P.C., Wang F., Pan Y.C. Endothelial monocyte-activating polypeptide II. A novel tumour-derived polypeptide that activates host-response mechanisms. // J. Biol. Chem. – 1992. – 267, N 28. – P. 20239–20247.

Ivakhno S.S., Kornelyuk A.I. Cytokine-like activities of some aminoacyl-tRNA synthetases and auxiliary p43 cofactor of aminoacylation reaction and their role in oncogenesis // Experim. Oncol. – 2004. – 26, N 4. – P. 250–255.

Schwarz M.A., Kandel J., Brett J., Li J., Hayward J., Schwarz R.E., Chappey O., Wautier J.L., Chabot J., Gerfo P.L., Stern D. Endothelial-mono Endothelial-monocyte activating polypeptide II. A novel antitumour cytokine that suppresses primary and metastatic tumour growth and induces apoptosis in growing endothelial cells // J. Exp. Med. – 1999. – 190, N 3. – P. 341–354.

Schwarz R.E., Schwarz M.A. In vivo therapy of local tumour progression by targeting vascular endhothelium with EMAP II // J. Surg. Res. – 2004. – 120. – P. 64–72.

Schwarz R.E., Awasthi N., Konduri S., Cafasso D., Schwarz M.A. EMAP II-based antiangiogenic-antiendothelial in vivo combination therapy of pancreatic cancer. // Am. Surg. Oncol. – 2010. – 17.– P. 1442–1452.

Reznikov A.G., Chaykovskaya L.V., Polyakova L.I., Kornelyuk A.I. Antitumor effect of endothelial monocyre-activating polypeptide-II on human prostate adenocarcinoma in mouse xenograft model // Exper. Oncol. – 2007. – 29, N 4. – P. 267–271.

Возианов А.Ф., Резников А.Г., Корнелюк А.И., Романенко А.М., Чайковская Л.В., Полякова Л.И., Григоренко В.Н. Влияние препаратов рекомбинантного белка ЕМАР II на рост, гистологические и гистохими- ческие характеристики гетеротрансплантантов рака простаты человека // Короткі повідомлення. – 2008. – Т. 14, № 4. – С. 719–729.

Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инже- нерии. Молекулярное клонирование. – М.: Мир, 1984, – 479 с.

Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. – 1970. – 277. – № 259. – P. 680–685.

Kornelyuk A.I., Tas M.P., Dubrovsky A.L., Murray J.C. Cytokine activity of the non-catalytic EMAP-2-like domain of mammalian tyrosyl-tRNA synthetase // Biopolimery і kletka. – 1999. – 15, № 2. – P. 168–172.

Славченко И.В., Борейко Е.В. Фенотипическое проявление осо- бенностей метаболизма клеток Escherichia coli BL 21(DE3) при выращи- вании на средах, содержащих разные источники углерода // Біополімери і клітина. – 2002. – Т. 18. – № 3. – С. 232–236.

Studier F.W., Moffatt B.A. Use of bacteriophage T7 RNA polymerase to direct selective high-level expression of cloned genes // J. Mol. Biol. – 1986. – 189D, ¹ 1. – P. 113–130.





DOI: https://doi.org/10.18524/2307-4663.2010.3(11).98933

Посилання

  • Поки немає зовнішніх посилань.


Creative Commons License
Ця робота ліцензована Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License.

ISSN 2076-0558 (Print); 2307-4663 (Online)