МОЛЕКУЛЯРНА БІОТЕХНОЛОГІЯ ДІАГНОСТИКИ БАКТЕРІАЛЬНОГО РАКУ ХМЕЛЮ ЗВИЧАЙНОГО
DOI:
https://doi.org/10.18524/2307-4663.2015.1(29).48033Ключові слова:
хміль звичайний, бактеріальний рак, полімеразна ланцюгова реакція, біотехнологіяАнотація
Мета. Розробка молекулярної біотехнології діагностики бактеріального раку у хмелю звичайного. Методи. Ізоляція чистої культури клітин, екстракція ДНК, полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР), гель-електрофорез. Результати досліджень. Для екстракції тотальної ДНК з тканин хмелю звичайного використано буфер, який враховує наявність у тканинах хмелю специфічних сполук. Проведена ПЛР з праймерами до генів вірулентності і патогенності Тi-плазміди і ДНК чистої культури збудника бактеріального раку рослин Agrobacterium tumefaciens, здорових зразків хмелю звичайного, зразків хмелю звичайного з візуальними симптомами бактеріального раку і суміші ДНК агробактерій і здорового хмелю, взяті в пропорції 1:1, 1:5, 1:10. Отримано продукти ПЛР з праймерами до генів патогенності і вірулентності Тi-плазміди і ДНК, виділеними з чистої культури A. tumefaciens, тканин зразків хмелю звичайного з візуальними симптомами ураження агробактерій і суміші ДНК агробактерій і здорового хмелю. За результатами ПЛР з тотальною ДНК здорових зразків хмелю і в негативному контролі (ПЛР-суміш без ДНК) продуктів ампліфікації не виявлено. Хворими бактеріальним раком вважали ті зразки хмелю звичайного, в тотальній ДНК яких виявлено гени вірулентності і патогенності Ті-плазміди. Молекулярна біотехнологія діагностики бактеріального раку хмелю звичайного складається з етапу виділення і очищення тотальної ДНК з тканин хмелю, етапу двокрокової ПЛР-детекції Ті-плазміди і генів ipt і virD2, що відповідають за патогенність і вірулентність, і етапу гель-електрофоретичного розділення продуктів ампліфікаціі, їх візуалізації та обліку результатів. Висновки. Діагностика бактеріального раку хмелю повинна включати детекцию генів патогенності і вірулентності ipt і virD2.
Посилання
Ліманська Н. В. Наявність патогенних штамів Agrobacterium vitis у ґрунті виноградників // Вісник аграрної науки. – 2005. – № 2. – С. 81–83.
Chadwick L. R., Pauli G. F., Farnsworth N. R. The pharmacognosy of Humulus lupulus L. (hops) with an emphasis on estrogenic properties // Phytomedicine − 2006. – 13. – P. 119–131.
Haas J. M., Moore L. W., Ream W., Manulis S. Universal PCR Primers for Detection of Phytopathogenic Agrobacterium Strains // Appl. Environ. Microbiol. – 1995. – 61, № 8. – P. 2879–2884.
Jia Y. H., Lia L. P., Houa Q. M., Pana Shen Q. An Agrobacterium gene involved in tumorigenesis encodes an outer membrane protein exposed on the bacterial cell surface // Gene. – 2002. – 284. – P. 113–124.
Okada Y., Saeki K., Inaba A., Suda N., Kaneko T., Ito K. Construction of gene expression system in hop (Humulus lupulus) lupulin gland using valerophenone synthase promoter // Plant Physiol. – 2003. – 160. − P. 1101–1108.
Pionnat S., Keller H., Richer D. Ti plasmids from Agrobacterium characterize rootstock clones that initiated a spread of crown gall disease in Mediterranean countries // Appl. Environm. Microbiol. – 1999. – 65, № 9. – P. 4197–4206.
##submission.downloads##
Опубліковано
Номер
Розділ
Ліцензія
Авторське право (c) 2015 Мікробіологія і біотехнологія
Ця робота ліцензується відповідно до Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License.
