АКТИВНІСТЬ ТА КІНЕТИЧНІ ВЛАСТИВОСТІ АДЕНОЗИН-5'-ФОСФОСУЛЬФАТРЕДУКТАЗИ КИШКОВИХ СУЛЬФАТВІДНОВЛЮВАЛЬНИХ БАКТЕРІЙ
DOI:
https://doi.org/10.18524/2307-4663.2014.2(26).48259Ключові слова:
активність АПС-редуктази, кінетичний аналіз, сульфатвідновлювальні бактерії, кишкові мікробіоценози, запальні захворювання кишечника, виразковий колітАнотація
Аденозин-5'-фосфосульфат (АПС) редуктаза та кінетичні властивості цього ферменту кишкових сульфатвідновлювальних бактерій Desulfovibrio piger Vib-7 і Desulfomicrobium sp. Rod-9 ніколи не були добре охарактеризовані й досі недосліджені. Мета роботи дослідити активність дисиміляційної АПС-редуктази у безклітинних екстрактах кишкових відновлювальних бактерій D. piger Vib-7 і Desulfomicrobium sp. Rod-9, а також виконати кінетичний аналіз реакції досліджуваного ферменту. Методи. У цій роботі використані мікробіологічні, біохімічні та біофізичні методи досліджень, а також застосована статистична обробка результатів; отримані результати порівняні з даними літератури. Результати. Досліджено активність дисиміляційної АПС-редуктази сульфатвідновлювальних бактерій, виділених з кишечника людини. Найвища активність цього ферменту (0,34±0,029 U×мг-1 білка) виміряна у безклітинному екстракті, отриманого з клітин D. piger Vib-7, а ніж зі штаму Desulfomicrobium sp. Rod-9 (0,22±0,018 U×мг-1 білка). Визначено оптимальну температуру (+35ºC) і рН (8,0) для реакції досліджуваного ферменту. Проведено аналіз кінетичних властивостей бактеріальної АПС-редуктази. Досліджено активність АПС-редуктази, початкову (миттєву) швидкість реакції (V0) і максимальну швидкість АПС-редуктазної реакції (Vmax) в обох бактеріальних штамів D. piger Vib-7 і Desulfomicrobium sp. Rod-9. Визначено константи Міхаеліса (Km) для ферментативної реакції (4.33±0,47 і 3,57±0,32 мМ для D. piger Vib-7 і Desulfomicrobium sp. Rod-9, відповідно). Висновок. Результати досліджень можуть бути перспективними для з’ясування етіологічної ролі цих бактерій у розвитку запальних захворювань кишечника людини і тварин.
Посилання
Bailey N.T.J. Statistical Methods in Biology. Cambridge University Press. – 1995. – 255 p.
Barton L.L., Hamilton W.A. Sulphate-Reducing Bacteria. Environmental and Engineered Systems. Cambridge: Cambridge University Pres. – 2010. – 553 p.
Bick J.A., Dennis J.J., Zylstra G.J., Nowack J., Leustek T. Identification of a New Class of 5′-Adenylylsulfate (APS) Reductases from Sulfate-Assimilating Bacteria // J Bacteriol. – 2000. – 182(1). – P. 135–142.
Cummings J.H., Macfarlane G.T., Macfarlane S. Intestinal Bacteria and Ulcerative Colitis // Curr Issues Intest Microbiol. – 2003. – 4. –P. 9–20.
Gavel O.Y., Bursakov S.A., Calvete J.J. et al. ATP Sulfurylases from Sulfate-Reducing Bacteria of the Genus DesulfoVibrio. A Novel Metalloprotein Containing Cobalt and Zinc // Biochemistry. – 1998. – 37. – P. 16225–16232.
Keleti T. Basic Enzyme Kinetics. Akademiai Kiado. – 1988. – 422 p.
Kushkevych I.V. Sulfate-reducing bacteria of the human intestine. I. Dissimilatory sulfate reduction // Sci Int J Biological studies/Studia Biologica. – 2012. – 6(1). –P. 149–180.
Kushkevych I.V. Sulfate-reducing bacteria of the human intestine. II. The role in the diseases development // Sci Int J Biological studies/Studia Biologica. – 2012. – 6(2). –P. 221–250.
Kushkevych I.V. Identification of sulfate-reducing bacteria strains of human large intestine // Sci Int J Biological studies/Studia Biologica. – 2013. – 7(3). – P. 115–124.
Kushkevych I.V., Bartos M., Bartosova L. Sequence analysis of the 16S rRNA gene of sulfate-reducing bacteria isolated from human intestine // Int J Curr Microbiol Appl Sci. – 2014. – 3(2). – P. 239–248.
Lowry O.H., Rosebrough N.J, Farr A.L., Randall R.J. Protein determination with the Folin phenol reagent // J Biol Chem. – 1951. – 193. – P. 265–275.
Peck H.D., Deacon T.E., Davidson J.T. Studies on adenosine 5′- hosphosulfate reductase from Desulfovibrio desulfuricans and Thiobacillus thioparus. I. The assay and purification // Biochim. Biophys Acta. –1965. – 96. –P. 429–446.
Peck H.D., Van Beeumen J., LeGall J. Biochemistry of Dissimilatory Sulphate Reduction and Discussion // Phil Trans R Soc Lond. B. – 1982. – 298. – P. 443–466.
Segal I.H. Enzyme kinetics: behavior and analysis of rapid equilibrium and steady-state enzyme systems / John Wiley & Sons, New York. 1975.
##submission.downloads##
Опубліковано
Номер
Розділ
Ліцензія
Авторське право (c) 2014 Мікробіологія і біотехнологія
Ця робота ліцензується відповідно до Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License.
Автор передає журналу (університету) на безоплатній основі невиключні права на використання статті (на весь строк дії авторського права починаючи з моменту публікації, розміщення статті на веб-сторінці журналу, в репозитарії відкритого доступу) без одержання прибутку; на відтворення статті чи її частин в електронній формі (включаючи цифрову); виготовлення ії електронних копій для постійного архівного зберігання; виготовлення електронних копій статті для некомерційного розповсюдження; внесення статті до бази даних репозитарію; надання електронних копій статті в доступі мережі інтернет.
Автор гарантує, що у статті не використовувалися статті або авторські права, які належать третім особам; гарантує, що на момент розміщення статті на веб-сторінці, в репозитарії ОНУ лише йому належать виключні майнові права на статтю, що розміщується; майнові права на статтю ні повністю, ні в частині нікому не передано (не відчуджено), майнові права на статтю ні повністю, ні в частині не є предметом застави, судового спору або претензій з боку третіх осіб.
Автор зберігає за собою право використовувати самостійно чи передавати права на використання статті третім особам.
Автор надає журналу право на використання статті такими способами:
переробляти, адаптувати або іншим чином змінювати її за погодженням з автором; перекладати статтю у випадку, коли стаття викладена мовою іншою, ніж мова, якою передбачена публікація у виданні. Якщо журнал виявить бажання використовувати статтю іншими способами: перекладати, розміщувати повністю або частково у мережі інтернет, публікувати статтю в інших, в тому числі іноземних виданнях, включати статтю як складову частину до інших збірників, антологій, енциклопедій тощо, умови оформлюються додатковою угодою.
Автор підтверджує, що він є автором (співавтором) цієї статті; авторські права на дану статтю не передані іншому видавцю; дана стаття не була раніше опублікована у будь-якому іншому виданні до публікації її журналом.
Публікація праць в Журналі здійснюється на некомерційній основі. Комісійна плата за оформлення статті не стягується.
