АКТИВНІСТЬ ТА КІНЕТИЧНІ ВЛАСТИВОСТІ АДЕНОЗИН-5'-ФОСФОСУЛЬФАТРЕДУКТАЗИ КИШКОВИХ СУЛЬФАТВІДНОВЛЮВАЛЬНИХ БАКТЕРІЙ

І. В. Кушкевич

Анотація


Аденозин-5'-фосфосульфат (АПС) редуктаза та кінетичні властивості цього ферменту кишкових сульфатвідновлювальних бактерій Desulfovibrio piger Vib-7 і Desulfomicrobium sp. Rod-9 ніколи не були добре охарактеризовані й досі недосліджені. Мета роботи дослідити активність дисиміляційної АПС-редуктази у безклітинних екстрактах кишкових відновлювальних бактерій D. piger Vib-7 і Desulfomicrobium sp. Rod-9, а також виконати кінетичний аналіз реакції досліджуваного ферменту. Методи. У цій роботі використані мікробіологічні, біохімічні та біофізичні методи досліджень, а також застосована статистична обробка результатів; отримані результати порівняні з даними літератури. Результати. Досліджено активність дисиміляційної АПС-редуктази сульфатвідновлювальних бактерій, виділених з кишечника людини. Найвища активність цього ферменту (0,34±0,029 U×мг-1 білка) виміряна у безклітинному екстракті, отриманого з клітин D. piger Vib-7, а ніж зі штаму Desulfomicrobium sp. Rod-9 (0,22±0,018 U×мг-1 білка). Визначено оптимальну температуру (+35ºC) і рН (8,0) для реакції досліджуваного ферменту. Проведено аналіз кінетичних властивостей бактеріальної АПС-редуктази. Досліджено активність АПС-редуктази, початкову (миттєву) швидкість реакції (V0) і максимальну швидкість АПС-редуктазної реакції (Vmax) в обох бактеріальних штамів D. piger Vib-7 і Desulfomicrobium sp. Rod-9. Визначено константи Міхаеліса (Km) для ферментативної реакції (4.33±0,47 і 3,57±0,32 мМ для D. piger Vib-7 і Desulfomicrobium sp. Rod-9, відповідно). Висновок. Результати досліджень можуть бути перспективними для з’ясування етіологічної ролі цих бактерій у розвитку запальних захворювань кишечника людини і тварин.


Ключові слова


активність АПС-редуктази; кінетичний аналіз; сульфатвідновлювальні бактерії; кишкові мікробіоценози; запальні захворювання кишечника; виразковий коліт

Повний текст:

PDF (English)

Посилання


Bailey N.T.J. Statistical Methods in Biology. Cambridge University Press. – 1995. – 255 p. 2. Barton L.L., Hamilton W.A. Sulphate-Reducing Bacteria. Environmental and Engineered Systems. Cambridge: Cambridge University Pres. – 2010. – 553 p. 3. Bick J.A., Dennis J.J., Zylstra G.J., Nowack J., Leustek T. Identification of a New Class of 5′-Adenylylsulfate (APS) Reductases from Sulfate-Assimilating Bacteria // J Bacteriol. – 2000. – 182(1). – P. 135–142. 4. Cummings J.H., Macfarlane G.T., Macfarlane S. Intestinal Bacteria and Ulcerative Colitis // Curr Issues Intest Microbiol. – 2003. – 4. –P. 9–20. 5. Gavel O.Y., Bursakov S.A., Calvete J.J. et al. ATP Sulfurylases from Sulfate-Reducing Bacteria of the Genus DesulfoVibrio. A Novel Metalloprotein Containing Cobalt and Zinc // Biochemistry. – 1998. – 37. – P. 16225–16232. 6. Keleti T. Basic Enzyme Kinetics. Akademiai Kiado. – 1988. – 422 p. 7. Kushkevych I.V. Sulfate-reducing bacteria of the human intestine. I. Dissimilatory sulfate reduction // Sci Int J Biological studies/Studia Biologica. – 2012. – 6(1). –P. 149–180. 8. Kushkevych I.V. Sulfate-reducing bacteria of the human intestine. II. The role in the diseases development // Sci Int J Biological studies/Studia Biologica. – 2012. – 6(2). –P. 221–250. 9. Kushkevych I.V. Identification of sulfate-reducing bacteria strains of human large intestine // Sci Int J Biological studies/Studia Biologica. – 2013. – 7(3). – P. 115–124. 10. Kushkevych I.V., Bartos M., Bartosova L. Sequence analysis of the 16S rRNA gene of sulfate-reducing bacteria isolated from human intestine // Int J Curr Microbiol Appl Sci. – 2014. – 3(2). – P. 239–248. 11. Lowry O.H., Rosebrough N.J, Farr A.L., Randall R.J. Protein determination with the Folin phenol reagent // J Biol Chem. – 1951. – 193. – P. 265–275. 12. Peck H.D., Deacon T.E., Davidson J.T. Studies on adenosine 5′- hosphosulfate reductase from Desulfovibrio desulfuricans and Thiobacillus thioparus. I. The assay and purification // Biochim. Biophys Acta. –1965. – 96. –P. 429–446. 13. Peck H.D., Van Beeumen J., LeGall J. Biochemistry of Dissimilatory Sulphate Reduction and Discussion // Phil Trans R Soc Lond. B. – 1982. – 298. – P. 443–466. 14. Segal I.H. Enzyme kinetics: behavior and analysis of rapid equilibrium and steady-state enzyme systems / John Wiley & Sons, New York. 1975.


Пристатейна бібліографія ГОСТ






DOI: https://doi.org/10.18524/2307-4663.2014.2(26).48259

Посилання

  • Поки немає зовнішніх посилань.


Creative Commons License
Ця робота ліцензована Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License.

ISSN 2076-0558 (Print); 2307-4663 (Online)