СУБСТРАТНА СПЕЦИФIЧНIСТЬ ПЕПТИДАЗИ 2 ВACILLUS THURINGIENSIS IМВ В-7324
DOI:
https://doi.org/10.18524/2307-4663.2013.2(22).48888Ключові слова:
субстратна специфічність, пептидаза, константа Міхаеліса KmАнотація
Мета. Вивчення субстратної специфічності очищеної пептидази 2 Вacillus thuringiensis IМВ В-7324. Методи. Для вивчення субстратної специфічності пептидази 2 використовували білки: еластин, фібрин, фібриноген, колаген і казеїн. Визначення оптимальних співвідношень ензим-субстрат проводили за допомогою повного двофакторного досліду. Спорідненість (константу Міхаеліса, Km) до субстратів пептидази 2 B. thuringiensis IMB B-7324 визначали за методом подвійних обернених величин в координатах Лайнуївера-Берка (1/ν0–1/[S]). Для обчислення та графічного представлення результатів повного двофакторного експерименту використовували метод стрімкого сходження (метод Бокса-Уілсона) та комп’ютерну систему аналізу даних STATISTICA 8.0. Результати. Дослідження гідролізу нативних білкових субстратів пептидазою 2 В. thuringiensis IМВ В-7324 показало, що ензим здатний розщеплювати фібрин, фібриноген, казеїн і колаген. Для ефективного гідролізу білків за результатами повного двофакторного досліду було встановлено оптимальні співвідношення концентрацій ензиму і субстратів: 1 мг пептидази 2 здатен розщеплювати 54 мг фібрину, 67 мг фібриногену, 25 мг казеїну і 49 мг колагену. Показано, що досліджуваний ензим виявляє вищу спорідненість до
фібрину і казеїну, для яких значення константи Міхаеліса Km становить 1,1 і 1,2 мг, відповідно. Висновки. Пептидаза 2 B. thuringiensis IМВ В-7324 характеризується вищою специфічністю щодо фібрину і фібриногену, ніж до казеїну і колагену, проте більшою спорідненістю до фібрину і казеїну.
Посилання
Лакин Г.Ф. Биометрия / Г. Ф. Лакин. – М.: Высш. Школа, 1990. – 352 с. 2. Нідялкова Н.А., Мацелюх О.В., Варбанець Л.Д. Виділення фібринолітичної пептидази Bacillus thuringiensis IMB B-7324 // Мікробіол. журн. – 2012. –74, № 5. – С. 9–15. 3. Нідялкова Н.А., Мацелюх О.В., Варбанець Л.Д. Оптимізація середовища для синтезу фібринолітичної пептидази Bacillus thuringiensis IМВ В-7324 // Біотехнологія. – 2012. – 5, № 4. – С. 74–81. 4. Петрова И.С., Винцюнайте М .Н. Определение протеолитической активности ферментных препаратов микробного происхождения // Прикл. биохимия и микробиология. – 1966. – 2, № 1. – С. 322–327. 5. Baehaki A., Suhartono M.T., Sukarno, Syah D., Sitanggang A.B., Setyahadi S., Meinhardt F. Purification and characterization of collagenase from Bacillus licheniformis F11.4 // Afr. J. Microbiol. Res. – 2012. – 6, N 10. – P. 2373–2379. 6. Chung M.C., Popova T.G., Millis B.A., Mukherjee D.V., Zhou W., Liotta L.A., Petricoin E.F., Chandhoke V., Bailey C., Popov S.G. Secreted Neutral Metalloproteases of Bacillus anthracis as Candidate Pathogenic Factors // J. Biolog. Chem. – 2006. – 281, N 42. – P. 31408–31418. 7. Grass G., Schierhorn A., Sorkau E., Müller H., Rücknagel P., Nies D.H., Fricke B. Camelysin is a novel surface metalloproteinase from Bacillus cereus // Infect. Immun. – 2004. – 72, N 1. – P. 219–228. 8. Kumari B.L., Rani M.R. Characterization studies on caseinolytic extracellular alkaline protease from a mutant Bacillus licheniformis // Int. J. LifeSc. Bt & Pharm. Res. – 2013. – 2, № 1. – P. 284–289. 9. Liu L., Ma M., Cai Z., Yang X., Wang W. Purification and Properties of a Collagenolytic Protease Produced by Bacillus cereus MBL13 Strain // Food Technol. Biotechnol. – 2010. – 48, N 2. – P. 151–160. 10. Lowry O.H., Rosebrough H.J., Faar A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. – 1951. – 193, N 1. – Р. 265–275. 11. Mandl I. Collagenase // Science. – 1970. – 169, N 3951. – Р. 1234–1238. 12. Masada M. Determination of the thrombolytic activity of Natto extract // Food style. – 2004. – 8, N 1. – Р. 92–95. 13. Morya V.K., Yadav D. Production and partial characterization of neutral protease by an indigenously isolated strain of Aspergillus tubingensis NIICC-08155 [Електронний ресурс] // The Internet J. Microbiol. – 2010. – 8, N 1. – Режим доступу до журн.: http://www.ispub.com/journal/the-internet-journal-of-microbiology/volume-8-number-1/productionand-partial-characterization-of-neutral-protease-by-an-indigenously-isolatedstrain-of-aspergillus-tubingensis-niicc-08155-2.html#sthash.EZo6gHeY.dpbs. 14. Rashad M.M., Mahmoud A.E., Al-Kashef A.S., Nooman M.U. Purification and Characterization of a Novel Fibrinolytic Enzyme by Candida guilliermondii Grown on Sunflower Oil Cake // J. Appl. Sci. Res. – 2012. – 8, N 2. – P. 635–645. 15. Trombridg G.O. Purification of human elastase / G.O. Trombridg, H.D. Moon // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. – 1972. – 141, 3. – P. 928–931. 16. Wang C. T., Ji B. P., Li B., Nout R., Li P.L., Ji H., Chen L.F. Purification and characterization of a fibrinolytic enzyme of Bacillus subtilis DC33, isolated from Chinese traditional Douchi // J. Ind. Microbiol. Biotechnol. – 2006. – 33, N 9. – P. 750–758.
##submission.downloads##
Опубліковано
Номер
Розділ
Ліцензія
Авторське право (c) 2013 Мікробіологія і біотехнологія
Ця робота ліцензується відповідно до Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License.
Автор передає журналу (університету) на безоплатній основі невиключні права на використання статті (на весь строк дії авторського права починаючи з моменту публікації, розміщення статті на веб-сторінці журналу, в репозитарії відкритого доступу) без одержання прибутку; на відтворення статті чи її частин в електронній формі (включаючи цифрову); виготовлення ії електронних копій для постійного архівного зберігання; виготовлення електронних копій статті для некомерційного розповсюдження; внесення статті до бази даних репозитарію; надання електронних копій статті в доступі мережі інтернет.
Автор гарантує, що у статті не використовувалися статті або авторські права, які належать третім особам; гарантує, що на момент розміщення статті на веб-сторінці, в репозитарії ОНУ лише йому належать виключні майнові права на статтю, що розміщується; майнові права на статтю ні повністю, ні в частині нікому не передано (не відчуджено), майнові права на статтю ні повністю, ні в частині не є предметом застави, судового спору або претензій з боку третіх осіб.
Автор зберігає за собою право використовувати самостійно чи передавати права на використання статті третім особам.
Автор надає журналу право на використання статті такими способами:
переробляти, адаптувати або іншим чином змінювати її за погодженням з автором; перекладати статтю у випадку, коли стаття викладена мовою іншою, ніж мова, якою передбачена публікація у виданні. Якщо журнал виявить бажання використовувати статтю іншими способами: перекладати, розміщувати повністю або частково у мережі інтернет, публікувати статтю в інших, в тому числі іноземних виданнях, включати статтю як складову частину до інших збірників, антологій, енциклопедій тощо, умови оформлюються додатковою угодою.
Автор підтверджує, що він є автором (співавтором) цієї статті; авторські права на дану статтю не передані іншому видавцю; дана стаття не була раніше опублікована у будь-якому іншому виданні до публікації її журналом.
Публікація праць в Журналі здійснюється на некомерційній основі. Комісійна плата за оформлення статті не стягується.
