РОЗРОБКА РЕКОМБIНАНТНОГО ПОЗИТИВНОГО КОНТРОЛЮ ВIРУСУ ДIАРЕЇ ВЕЛИКОЇ РОГАТОЇ ХУДОБИ I ТА II ТИПУ ДЛЯ ВИКОРИСТАННЯ В ПЛР
DOI:
https://doi.org/10.18524/2307-4663.2013.3(23).48929Ключові слова:
вірусна діарея великої рогатої худоби, ПЛР, клонування, pTZ57R/T, рестрикційний аналізАнотація
Мета. Розробка методу ампліфікації та клонування гену Erns вірусу діареї великої рогатої худоби з метою отримання позитивного контролю для полімеразної ланцюгової реакції. Методи. У роботі були використані віруси діареї (ВД) ВРХ I типу штам Ossloss та II типу штам Kosice. Вірусну РНК екстрагували за допомогою методу афінної сорбції. Ам пліфікацію ділянки гену Erns здійснювали з використанням специфічних праймерів. ПЛР -продукт був інтегрований до вектору для клонування pTZ57R/T. Для напрацювання рекомбінантних плазмід проводили трансформацію клітин бактерії E. coli DH10B. Плазмідвмісні клони виявляли за допомогою селективного поживного середовища, вставку – методом ПЛР . Наявність вставки гена Erns підтверджували за допомогою рестрикційного аналізу з використанням рестриктаз EcoRI та HindIII. Результати. В ході проведених досліджень були сконструйовані рекомбінантні плазміди, які несуть вставку фрагменту гену Erns (826 пар нуклеотидів) збудників ВД ВРХ I та II типів. Висновки. Отримані рекомбінантні плазміди можуть використані як позитивний контроль для ПЛР.
Посилання
Герілович А.П. Застосування методу полімеразної ланцюгової реакції в системі контролювання контамінації сторонніми вірусами і мікоплазмами культур клітин та ветеринарних імунобіологічних препаратів // Ветеринарна біотехнологія. – 2008. – Бюл. № 13. – C. 333–339. 2. Baxi M., McRae D., Baxi S. et al. A one-step multiplex real-time RTPCR for detection and typing of bovine viral diarrhea viruses // Veterinary Microbiology. – 2006. – 116. – P. 37–44. 3. Behera S.P., Mishra N., Vilcek S. et al. Genetic and antigenic characterization of bovine viral diarrhoea virus type 2 isolated from cattle in India // Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. – 2011. – 34, N 2. – P. 189–196. 4. Boom R., Sol C., Salimans M. et al. Rapid and simple methods for purification of nucleic acids // Journal of Clinical Microbiology. – 1990. – 28, N 3. – Р. 495–503. 5. Booth R.E., Brownlie J. Establishing a pilot bovine viral diarrhoea virus eradication scheme in Somerset // Vet. Rec. – 2012. – 170, N 3. – P. 73–80. 6. Carman S., van Dreumel T., Ridpath J. et al. Severe acute bovine viral diarrhea in Ontario, 1993–1995 // J. Vet. Diagn. Invest. – 1998. – 10. – P. 27–35. 7. Donis R.O., Corapi W., Dubovi E.J. Neutralizing monoclonal antibodies to bovine viral diarrhea virus bind to the 56K to 58K glycoprotein // J. Gen. Virol. – 1988. – 69. – P. 77–86. 8. Heinz F., Collett M., Purcell R. et al. Family Flaviviridae. Virus taxonomy // Abstract of 7th International Committee for the Taxonomy of Viruses, San Diego, USA, 2000. – P. 859–878. 9. Krey T., Thiel H.-J., Rumenapf T. Acid-Resistant Bovine Pestivirus Requires Activation for pH-Triggered Fusion during Entry // J. Virol. – 2005. – 79, N 7. – P. 4191–4200. 10. Meyers G., Thiel H.J. Molecular characterization of pestiviruses // Adv. Vir. Res. – 1996. – 47. – P. 53–118. 11. Sullivan D.G., Akkina R.K. A nested polymerase chain reaction assay to differentiate pestiviruses // Virus Res. – 1995. – 38, N 3–8. – Р. 231–239. 12. Thiel H.J., Collett M.S., Gould E.A. et al. Flaviviridae: Virus taxonomy // Abstract of 8th International Committee on Taxonomy of Viruses, Amsterdam, Elsevier-Academic Press. – 2005. – P. 981–998. 13. Weiland E., Stark R., Haas B. et al. Pestivirus glycoprotein which induces neutralizing antibodies forms part of a disulfide-linked heterodimer // J. Virol. – 1990. – 64. – P. 3563–3569. 14. Weiland F., Weiland E., Unger G. et al. Localization of pestiviral proteins Erns and E2 at the cell surface and on isolated particles // J. Gen. Virol. – 1999. – 80. – P. 1157–1165. 15. Thermo Scientific pTZ57R Plasmid Map – Access mode: http:// www.thermoscientificbio.com/uploadedFiles/Resources/pTZ57R-map.pdf
##submission.downloads##
Опубліковано
Номер
Розділ
Ліцензія
Авторське право (c) 2013 Мікробіологія і біотехнологія
Ця робота ліцензується відповідно до Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License.
Автор передає журналу (університету) на безоплатній основі невиключні права на використання статті (на весь строк дії авторського права починаючи з моменту публікації, розміщення статті на веб-сторінці журналу, в репозитарії відкритого доступу) без одержання прибутку; на відтворення статті чи її частин в електронній формі (включаючи цифрову); виготовлення ії електронних копій для постійного архівного зберігання; виготовлення електронних копій статті для некомерційного розповсюдження; внесення статті до бази даних репозитарію; надання електронних копій статті в доступі мережі інтернет.
Автор гарантує, що у статті не використовувалися статті або авторські права, які належать третім особам; гарантує, що на момент розміщення статті на веб-сторінці, в репозитарії ОНУ лише йому належать виключні майнові права на статтю, що розміщується; майнові права на статтю ні повністю, ні в частині нікому не передано (не відчуджено), майнові права на статтю ні повністю, ні в частині не є предметом застави, судового спору або претензій з боку третіх осіб.
Автор зберігає за собою право використовувати самостійно чи передавати права на використання статті третім особам.
Автор надає журналу право на використання статті такими способами:
переробляти, адаптувати або іншим чином змінювати її за погодженням з автором; перекладати статтю у випадку, коли стаття викладена мовою іншою, ніж мова, якою передбачена публікація у виданні. Якщо журнал виявить бажання використовувати статтю іншими способами: перекладати, розміщувати повністю або частково у мережі інтернет, публікувати статтю в інших, в тому числі іноземних виданнях, включати статтю як складову частину до інших збірників, антологій, енциклопедій тощо, умови оформлюються додатковою угодою.
Автор підтверджує, що він є автором (співавтором) цієї статті; авторські права на дану статтю не передані іншому видавцю; дана стаття не була раніше опублікована у будь-якому іншому виданні до публікації її журналом.
Публікація праць в Журналі здійснюється на некомерційній основі. Комісійна плата за оформлення статті не стягується.
